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核酸提取仪的基因组DNA提取方法SDS法核酸提取仪的基因组DNA提取方法SDS法 一、SDS法原理： SDS是一种阴离子洗涤剂，在高温( 55-65 )下分解细胞，分离染色体，改变蛋白质，释放核酸。提高高盐( NH4Ac或KAc )的浓度，降低温度(冰浴)，沉淀蛋白质和多糖类杂质，离心去除沉淀。用苯酚或氯仿萃取上清液中的DNA，重复萃取后，用乙醇沉淀水相中的DNA。
二、SDS提取缓冲液的配方以及作用 1、终浓度50mM Tris-HCL(pH 8.0) 作用: tris-HCl ( ph8.0)为防止核酸被破坏提供了缓冲环境。 2.终浓度20mM EDTA(pH 8.0) 作用: EDTA螯合锰离子或镁离子抑制DNase活性。 3.终浓度0.4M NaCl 作用: NaCl提供高盐环境，充分溶解DNP，存在于液相中。 4.终浓度2％SDS 作用: SDS在高温( 55-65 )下分解细胞，改变蛋白质，释放核酸。 三、核酸提取仪的SDS法实验流程 动物组织液氮研磨或匀浆细胞裂解-萃取-上层溶液-醇沉淀-离心洗涤-干燥溶解-DNA溶液 四、核酸提取仪的SDS法应用 SDS法提取动物组织、细胞、全血、细菌、酵母等大部分实验材料基因组DNA。 |
